Son zamanlarda, DNA fragmantasyon testleri laboratuvar uygulamasına yaygın bir şekilde dahil edilmiştir. Erkek gametlerin döllenme süreçlerine, embriyo kalitesine ve erken gebelik evrelerinde bile embriyo gelişimine büyük katkısı olduğundan, DNA bütünlüğü ve sperm kalıtsal bilgileri yavrular için çok önemlidir. Sperm, erken embriyo gelişimi döneminde aktif olan proteinler için kodlanmış yaklaşık 3000 farklı türde mRNA içerir. Ayrıca henüz bilinmeyen ve oositte eşdeğeri olmayan başkaları da vardır.
Sperm Seçimi
ICSI’nin rutin prosedür olarak kullanılmaya başlanmasından bu yana, tek bir sperm hücresinin enjekte edilmesi gerektiğinden, sperm konsantrasyonu ve hareketliliği artık çok önemli olmadığından, standart semen analizinin önemi ihmal edilmiştir. Bir Hoffman modülasyon kontrast mikroskobu altında standart ICSI prosedürü veya büyütme × 400’de Nomarski optiği yapıldığında, sperm başının (boyut ve şekil) orta parçası ve kuyruğunun görselleştirilmesi ve değerlendirilmesi mümkündür, ancak ayrıntılı ultrastrüktürel morfoloji incelemesi sınırlıdır.
Geleneksel ICSI uygulandığında, morfolojik olarak normal spermi ayrıntılı yapısal portresine dayanarak değerlendirmek ve seçmek zor olacaktır. Vakuolizasyon, membran invajinasyonları, orta parça kalınlığı veya deformite, vb. Sperm başındaki yüksek vakuolizasyonun ilişkili olup olmadığı tartışmalıdır daha yüksek DNA fragmantasyonu ve anöploidi oranı ile embriyo kalitesi ve implantasyon sonrası gelişim üzerinde olumsuz etkilere ve erken gebelik evrelerinde daha yüksek gebelik kaybı sıklığına sahip olabilir. Yine de, bazı çiftler için ayrıntılı sperm incelemesi öncesinde ICSI tercih edilir.
İntrasitoplazmik morfolojik olarak seçilmiş sperm enjeksiyonu (IMSI), sperm morfolojisi değerlendirmesinin temel taşıdır. Hareketli sperm organel morfolojisinin (MSOME) incelenmesine dayanan IMSI, intrasitoplazmik enjeksiyon için hareketli ve morfolojik olarak normal spermlerin seçiminde kullanılan tek gerçek zamanlı, boyanmamış yöntemdir. IMSI ilk olarak Baratoov ve diğerleri tarafından tanıtılmıştır. MSOME seçimi, Diferansiyel parazit kontrastlı ters ışık yayan mikroskop veya Nomarski diferansiyel parazit kontrast optikleri ve x 6600 ila × 13.000 arasında değişen yüksek büyütme oranlarında dijital kamera altında yapılır. MSOME kriterleri kullanılarak hareketli sperm fraksiyonu ve her bir hücre malformasyonu, akrozom, akrozom sonrası lamina, boyun, mitokondri, kuyruk ve çekirdekten oluşan altı organelin morfolojik durumuna göre değerlendirilir. İncelenen örneklerdeki spermatozoanın sadece % 33’ü bu kriterlere göre morfolojik olarak normal görünmektedir.
Her alan için tanımlanan kusurlar şunlardır:
• Akrozomal alan – eksik, kısmi veya veziküle;
• Post-akrozomal lamina – yok veya veziküle;
• Boyun – abaksiyal, sitoplazmik damlacık.
• Mitokondri – eksiklik, kısmi, düzensizlik;
• Kuyruk – eksik, kıvrımlı, kırık, çok, kısa;
• Çekirdek – küçük veya büyük oval, dar, geniş veya kısa, bölgesel bozukluk, vakuoller nükleer alanın% 4’ünden fazlasını kaplar. Bununla birlikte, hareketli spermlerin değerlendirilmesi çeşitli bilim adamları tarafından farklı şekillerde belirlenebilir.
Yüksek büyütme altında hareketli spermatozoanın gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesinde en önemli olan şey, sperm hücresinin başındaki sayı, boyut ve lokasyondaki vakuollerin varlığının değerlendirilmesidir. Vakuollerin kesin kaynağı hala bilinmemektedir, ancak farklı hipotezler bunların sperm olgunlaşması sırasında spermatogenezin erken aşamalarından kaynaklandığını ve vakuol alanı nedeniyle sayılarının arttığını ileri sürmektedir. Diğer çalışmalar, spermatozoada vakuol oluşumunun inkübasyon ve ejakülasyondan sonraki kapasititasyon döneminde başladığını düşündürmektedir.
Bununla birlikte, yüksek vakuolizasyon veya sperm başındaki büyük vakuollerin varlığı, artmış DNA fragmantasyon oranları ve artmış kromatin olgunlaşmamışlık seviyesi ile ilişkili olabilir ve fertilizasyon ve gebelik oranlarını etkileyebilir. Sperm morfolojisi değerlendirmesi, sperm seçimi için kesin bir oran sistemi olarak Cassuto ve Barak Skoruna dayanabilir. Skorun oluşturulması için spermatozoonun altı parametresi dikkate alındı: kafa, akrozom, vakuol, baz, yerleştirme ve sitoplazmik damlacık (“HAVBIC”). Baş, vakuol ve baz anormallikler için ana kriterler olarak kabul edildi ve akrozom, yerleştirme ve sitoplazmik damlacık sperm değerlendirmesi için küçük kriterlerdir. Aşağıdaki denklem geliştirildi:
S c o r e o f s p e r m a t o z o a = ( 2 × H e a d ) + ( 3 × V a c u o l e ) + ( 1 × B a s e ) Spermatozoa puanı=2×Kafa+3×Koful+1×Baz E1
Formüle bağlı olarak, sperm hücreleri skoru 0 ile 6 arasında değişebilir ve kaliteye göre üç grup ayırt edilmiştir:
• Sınıf 1 – Yüksek kaliteli spermatozoa (skor 4–6)
• Sınıf 2 – Orta kalitede spermatozoa (skor 1–3)
• Sınıf 3 – Düşük kaliteli spermatozoa (skor 0)
IMSI kullanarak gebelik oranlarında ICSI ile karşılaştırıldığında artış gösteren ilk makalelere dayanarak], tanıtılmasından bu yana yöntem, zaman alıcı bir teknik olmasına rağmen, laboratuvar uygulamasına yaygın bir şekilde dahil edilmiştir.
Yüksek büyütme altında hareketli spermatozoanın değerlendirilmesi, yüksek düzeyde DNA fragmantasyonu sperm anöploidi, şiddetli oligo- veya oligoastenozoospermi ve / veya teratozoospermi, tekrarlayan implantasyon başarısızlıkları veya tekrarlayan erken düşükler öyküsü, ileri kadın yaşı ve ileri erkek yaşı olan hastalar için uygundur. Sonraki çalışmalar, erkek faktör kısırlığı olan hastalarda daha iyi sonuçlar elde etmek için sperm morfolojisini değerlendiren yeni yöntemin önemi hakkında daha fazla analiz ve bilgi sağlamıştır.
IMSI prosedürünün in vitro döngü sonuçları üzerindeki etkisi konusunda hala tartışmalı çalışma sonuçları vardır. Bununla birlikte, uygulamasına fayda sağlayacak görünen şey, sperm morfolojisi ve işlevinin daha iyi anlaşılmasıdır.
Genetik ve Sperm Sayısı
Y-kromozomu delesyonu azospermi, oligozoospermi (düşük sperm sayısı) veya anormal sperm morfolojisi ve motilitesi ile ilişkilidir. AZFa ve AZFb delesyonları saptandığında, testiküler sperm elde etme etkisiz olacaktır, ancak AZFc delesyonu olan çoğu erkek için başarılı bir seçenektir. Doğal gebe kalma ve Y-mikrodelesyon geçişini bildiren bir vaka vardır. Teşhis konulduğunda ve Y kromozomu kısırlığının Y’ye bağlı bir şekilde miras kaldığı düşünüldüğünde, hastalar genetik uzmanlarıyla spesifik genetik durumu tartışmalı ve bu durum gelecek nesillerde kısırlığa yol açabilir.
TESE seçeneğini elde etmek için araştırılabilecek diğer bir gen, Testis eksprese edilen gen 11’dir (TEX 11). Çalışmalar, TEX11’in (X’e bağlı mayoza özgü gen) azoospermik erkeklerde mutasyona uğradığını göstermektedir. Sperm elde etme bu hastalar için geçerli değildir. Konjenital bilateral vas deferens (CBAVD) yokluğu ve ejakülatta sperm hücrelerinin olmaması, mikrocerrahi TESE veya PESA ve ardından ICSI kullanılarak süper hale getirilebilir. CBAVD, kistik fibroz transmembran iletkenlik düzenleyici (CFTR) genindeki mutasyonlarla ilişkili olduğundan , durumu araştıran ve genetik testler ve prosedürlerden önce konsültasyon sağlanmalıdır çünkü çiftin çocuk sahibi olma riski vardır. (kistik fibroz)
Sonuç olarak, doğurganlık tedavisinin bir parçası olarak genetik danışmanlığın yanı sıra prenatal genetik tanı (PGT) veya preimplantasyon genetik tarama (PGS) önerilmelidir.
Kaynakça:
https://news.mit.edu/1996/sperm-0612#
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4009560/
Yazar: Özlem Güvenç Ağaoğlu